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孔雀石绿试剂盒样本前期处理如何处理?

发布时间: 2021-09-01  点击次数: 106次

孔雀石绿试剂盒样本前期处理如何处理?

5 样本前处理

5.1 样本处理前须知:

实验器具必须洁净并使用一次性吸头,以避免污染干扰实验结果。

5.2 配液:

配液1:1×样品复溶液

100 ml为例,取10 ml 10×复溶液加入50ml去离子水和40ml甲醇,充分混匀

配液2:1×工作洗涤液

浓缩洗涤液20倍稀释(1份洗涤液加19份去离子水)。

5.3 样本前处理步骤:

5.3.1 鱼、虾

1)取匀质无骨的样品1 g加入50 ml离心管中,加入0.3 ml 乙腈、6 ml乙酸乙酯充分震荡(不少于5分钟确保鱼肉没有结块)

2)室温下4000r/min 离心10min,取上清液3 ml加入10ml玻璃试管中,再加入氧化剂50 ul,震荡2分钟;

3)每管加入助溶剂50 ul(不振荡)50水浴环境下氮气吹干(吹完之后管底部应该有一滴液状物,当样本含油脂过高时,此时可见试管底部残留有黄色粘稠状液滴)

4)加入1 ml 1×样品复溶液,溶解混匀,50ul用于分析。

    样本稀释倍数:2     检测下限:0.1ppb

6 注意事项

6.1 室温低于25℃或试剂及样本没有回到室温(25℃)会导致所有标准的OD值偏低。

6.2 在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况,则会出现标准曲线不成线性,重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。

6.3 混合要均匀,洗板要彻底,在ELISA分析中的再现性,很大程度上取决于洗板的一致性。

6.4 在所有孵育过程中,用盖板膜封住微孔板,避免光线照射。

6.5 不要使用过了有效期的试剂盒,不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。

6.6 显色液若有任何颜色表明变质,应当弃之。0标准的吸光度值小于0.5个单位(A450nm< 0.5 )时,表示试剂可能变质。

6.7 反应终止液有腐蚀性,避免接触皮肤。

 


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