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小鼠白脂素(Asprosin)ELISA试剂盒要注意哪些细节?

发布时间: 2021-09-01  点击次数: 115次

小鼠白脂素(Asprosin)ELISA试剂盒要注意哪些细节?

 

首先需要注意样本处理细节,下面是各种样本具体处理时的细节。

1.  血清将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4过夜,然后1000×g离心20 分钟,取上清即可,或将上清置于-20-80保存,但应避免反复冻融。
2.  血浆EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的30分钟内于2-8 1000×g离心15分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20-80保存,但应避免反复冻融。
3.  组织匀浆:用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mLPBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟,取上清检测。

4.  细胞培养物上清或其它生物标本:1000×g离心20分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

注:标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。

 

操作的时候还有哪些需要注意的地方呢?

1.严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。

2.洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。

3.消除板底残留的液体和手指印,否则影响OD值。

4.底物显色液应呈无色或很浅的颜色,已经变蓝的底物液不能使用。

5.避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。

6.在储存和温育时避免强光直接照射。

7.平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。

8.任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。

9.不能使用过期产品。

10.如果可能传播疾病,所有的样品都应管理好,按照规定的程序处理样品和检测装置

 11.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。

2洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按120稀释,即120×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。

 


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