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人纤维蛋白ELISA试剂盒的技术流程介绍

发布时间: 2022-01-20  点击次数: 96次
  人纤维蛋白ELISA试剂盒技术流程:
  1、用缓冲液将抗体稀释至1-10ug/ml。在反应孔中加0.1ml,4℃ 过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次。
  2、加样:加一定稀释的待检样品0.05ml于上述已包被之反应孔中,置37℃ 孵育1小时。然后洗涤(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。
  3、加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.05ml。37℃ 孵育0.5~1小时,洗涤。
  4、加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟。
  5、结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。
  检测类型:酶联免疫法。
  实验类型: 夹心法。
  应用范围: 血清、血浆、组织匀浆、细胞培养物上清或其它相关液体。
  产品特点:重复性好,特异性强,性价比高,线性好。
  检测目的:人纤维蛋白ELISA试剂盒用于测定血清,血浆及相关液体等样本,例如适合检测包括血清、血浆、尿液、胸腹水、灌洗液、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等标本。
  标本的采集及保存:
  1、血清:标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000 x g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。
  2、血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内离心15分钟,或将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。
  3、组织匀浆:将动物的组织标本先用PBS洗涤,去除多余血液,匀浆化后放在20 mL PBS中于-20° C放置过夜,第二天,经过二次反复冻融破膜,将匀浆物5000x g离心5分钟,取上清即可检测。
  4、细胞培养物上清:请离心后收集上清,并将标本保存于-20℃,且应避免反复冻融。

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