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甲型流感病毒 H1N1-2009 核酸检测试剂盒

发布时间: 2022-08-03  点击次数: 35次

甲型流感病毒 H1N1-2009(IAV-H1-2009)核酸检测试剂盒(RT-PCR 荧光探针法)

 


【产品名称】

商品名称:甲型流感病毒 H1N1-2009(IAV-H1-2009)核酸检测试剂盒(RT-PCR 荧光探针法)

Name :Diagnostic Kit for Influenza A virus subtype H1-2009 RNA (RT-PCR Fluorescence Probing)

 

【包装规格】48 份/盒

【预期用途】

本试剂盒适用于检测的咽拭子标本等标本中甲型流感病毒 H1N1-2009RNA, 适用于甲型流感病毒 H1N1-2009 感染的辅助诊断。其检测结果仅供参考。

 

【检验原理】

本试剂盒用一对甲型流感病毒 H1N1-2009 特异性引物,结合一条特异性荧光探针,用一步法荧光 RT-PCR 技术对甲型流感病毒 H1N1-2009RNA 进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。

 

【试剂组成】

 

 

 

【储存条件及有效期】

-20℃±5℃,避光保存、运输、反复冻融少于 5 次,

有效期 12 个月。

【适用仪器】

ABI 7300、7500、ABI stepone / stepone plus 、安捷伦 MX3000P/3005P、MJ Opticon2 等其他荧光定量 PCR 检测仪。

 

【标本采集】

采集病人或患病动物的咽拭子标本,应使用专用采样拭子,适度拭抹咽后壁和两侧扁桃体部位,应避免触及舌部;迅速将拭子放入标本采集管中,旋紧管盖并密封, 以防干燥。

 

【保存和运输】

上述标本短期内可保存于-20℃,长期保存可置-70℃,但不能超过 6 个月,标本运送应采用 2~8℃冰袋运输,严禁反复冻融。

 

【使用方法】

1. 样品处理(样本处理区)

1.1 样本前处理

100uL 拭子标本于1.5mL 灭菌离心管中,按RNA 提取试剂盒说明书进行提取。

1.2 RNA 提取

推荐采用广州维伯鑫生物科技有限公司生产的 RNA 提取试剂盒离心柱提取,请按照试剂盒说明书进行操作。

 

2. 试剂配制(试剂准备区)

根据待检测样本总数,设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照;样品每满 7 份,多配制 1 份),每测试反应体系配制如下表:

试剂

IAV-H1-2009 反应液

酶液

用量

20μl

1μl

 

3. 加样(样本处理区)

将步骤 1 提取的 RNA、阳性质控品、阴性质控品各取 4μl,分别加入相应的反应管中,盖好管盖,混匀,短暂离心。

 

4. PCR 扩增(核酸扩增区)

4.1 将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内;

4.2 设置好通道、样品信息,反应体系设置为 25ul;荧光通道选择:

检测通道(Reporter Dye)FAM, 淬灭通道(Quencher Dye)NONE,请勿选择 ROX 参比荧光。

4.3 推荐循环参数设置:

 

 

 

 

5. 结果分析判定

5.1 结果分析条件设定

设置 Baseline  Threshold:一般直接按机器自动分析的结果分析,当曲线出现整体倾斜时,根据分析后图像调节 Baseline  start (一般可在 3~15 范围内调节)、stop (一般可在 5~20 范围内调节),以及 Threshold  Value (上下拖动阈值线至高于阴性对照),重新分析结果。

5.2 结果判断

阳性:检测通道 Ct 值≤35.0,且曲线有明显的指数增长曲线;

可疑:检测通道 35.0<Ct 值≤37,建议重复检测,如果检测通道仍为 35.0<Ct 值≤37,且曲线有明显的增长曲线,判定为阳性,否则为阴性;

阴性:样本检测结果 Ct 值>37 或无 Ct 值。

6. 检测方法的局限性

Ø 样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关;

Ø 样本提取过程中没有控制好交叉污染,会出现假阳性结果;

Ø 阳性对照、扩增产物泄漏,会导致假阳性结果;

Ø 病原体在流行过程中基因突变、重组,会导致假阴性结果;

Ø 不同的提取方法存在提取效率差异,会导致假阴性结果;

Ø 试剂运输,保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降,出现假阴性或定量检测不准确的结果;

Ø 本检测结果仅供参考,如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。

7. 质控标准

阴性质控品:无明显扩增曲线或无 Ct 值显示;

阳性质控品:扩增曲线有明显指数生长期,且 Ct 值≤32; 以上条件应同时满足,否则实验视为无效。

 

8. 产品性能指标

阴阳性参考品符合率:5 份阳性参考品符合率为 100%;10 份阴性参考品符合率为 100%。

检测限:5.0×102copies/ml。

精密度:批内、批间精密度检测 Ct 值的变异系数(CV)均小于等于 3%。

【注意事项】

Ø 所有操作严格按照说明书进行;

Ø 试剂盒内各种组分使用前应自然融化,完全混匀并短暂离心;

Ø 反应液应避光保存;

Ø 反应中尽量避免气泡存在,管盖需盖紧;

Ø 使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服;

Ø 样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行,以免交叉污染;

Ø 实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器;

Ø 试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。.

 

 

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