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人白脂素ELISA试剂盒的检测程序和注意事项介绍

发布时间: 2022-01-14  点击次数: 84次
  人白脂素ELISA试剂盒基于夹心法酶联免疫吸附测定技术,将抗体预包被到96孔板上。将标准品,测试样品和生物素偶联试剂添加到孔中并孵育,然后加入结合了HRP的试剂,并孵育整个平板,在每个阶段使用洗涤缓冲液去除未结合的结合物。TMB底物用于定量HRP酶促反应,添加TMB底物后,只有含有足够FBN1的孔才会产生蓝色产物,然后在加入酸性终止液后变为黄色。
  一、检测程序:
  1.加样:空白孔加入50μl标准品/样品稀释液,其余孔各加入标准品或待测样品50ul,将反应板混匀后置37℃,40分钟。
  2.洗板:用1×洗涤液将反应板充分洗涤4-6次,每孔加入1×洗液350μl,每次震荡/浸泡1-2分钟,向滤纸上印干。
  3.空白孔加入100ul生物素化抗体稀释液,其余孔各加入1×的生物素化抗体工作液100ul,混匀后置37℃,30分钟。
  4.洗板:同上。
  5.每孔加入SABC复合物工作液100ul,混匀后置37℃,20分钟。
  6.洗板:同上。
  7.每孔加入提前配置好的TMB混合液100ul,混匀后置37℃暗处反应10-20分钟。
  8.每孔加入100ul终止液,混匀,30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。
  二、注意事项:
  1.在试验中标准品和样本检测时建议作双孔检测,每次检测都应做标准曲线。
  2.洗涤过程很关键,洗涤不充分将导致精确度误差及OD值错误地升高,从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能 有结晶,属于正常现象,37℃水浴使结晶完全溶解后再配制洗涤液。
  3.检测时所有试剂都要恢复到室温,板条开封后剩余板条需封好,放回袋中2个月内用完。
  4.试剂盒使用超敏TMB溶液,若显色过深会出现絮状物,属正常现象,不影响结果判读。
  5.人白脂素ELISA试剂盒保存在2-8℃,使用室温平衡60分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶wan全溶解后再使用。样本在使用也要在室温平衡60分钟。
  6.实验用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。
  7.液体组分使用充分摇匀。

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