人白脂素ELISA试剂盒的检测程序和注意事项介绍

　　人白脂素ELISA试剂盒基于夹心法酶联免疫吸附测定技术，将抗体预包被到96孔板上。将标准品，测试样品和生物素偶联试剂添加到孔中并孵育，然后加入结合了HRP的试剂，并孵育整个平板，在每个阶段使用洗涤缓冲液去除未结合的结合物。TMB底物用于定量HRP酶促反应，添加TMB底物后，只有含有足够FBN1的孔才会产生蓝色产物，然后在加入酸性终止液后变为黄色。

　　一、检测程序：

　　1.加样：空白孔加入50μl标准品/样品稀释液，其余孔各加入标准品或待测样品50ul，将反应板混匀后置37℃，40分钟。

　　2.洗板：用1×洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，每孔加入1×洗液350μl，每次震荡/浸泡1-2分钟，向滤纸上印干。

　　3.空白孔加入100ul生物素化抗体稀释液，其余孔各加入1×的生物素化抗体工作液100ul，混匀后置37℃，30分钟。

　　4.洗板：同上。

　　5.每孔加入SABC复合物工作液100ul，混匀后置37℃，20分钟。

　　6.洗板：同上。

　　7.每孔加入提前配置好的TMB混合液100ul，混匀后置37℃暗处反应10-20分钟。

　　8.每孔加入100ul终止液，混匀，30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。

　　二、注意事项：

　　1.在试验中标准品和样本检测时建议作双孔检测，每次检测都应做标准曲线。

　　2.洗涤过程很关键，洗涤不充分将导致精确度误差及OD值错误地升高，从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能 有结晶，属于正常现象，37℃水浴使结晶*溶解后再配制洗涤液。

　　3.检测时所有试剂都要恢复到室温，板条开封后剩余板条需封好，放回袋中2个月内用完。

　　4.试剂盒使用超敏TMB溶液，若显色过深会出现絮状物，属正常现象，不影响结果判读。

　　5.人白脂素ELISA试剂盒保存在2-8℃，使用室温平衡60分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶wan全溶解后再使用。样本在使用也要在室温平衡60分钟。

　　6.实验用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

　　7.液体组分使用充分摇匀。