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小鼠D-乳酸ELISA试剂盒的检测原理和操作注意事项

发布时间: 2022-03-25  点击次数: 33次
  小鼠D-乳酸ELISA试剂盒酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。
  试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应,通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。
  一、小鼠D-乳酸ELISA试剂盒检测原理:
  本试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法(ELISA)。将标准品、待测样本加入到预先包被乳酸透明酶标包被板中,温育足够时间后,洗涤除去未结合的成分,再加入酶标工作液,温育足够时间后,洗涤除去未结合的成分。依次加入底物A、B,底物(TMB)在辣根过氧化物酶(HRP)催化下转化为蓝色产物,在酸的作用下变成黄色,颜色的深浅与样品中乳酸浓度呈正相关,450nm波长下测定OD值,根据标准品和样品的OD值,计算样本中乳酸含量。
  二、操作注意事项:
  (1)试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
  (2)实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
  (3)不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
  (4)使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。
  (5)使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
  (6)洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

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