如何选择合适的阳性对照?
阳性对照的基本组成应该尽量与检测样本的组成一致,一般阳性对照多以含蛋白保护剂的缓冲液为基质,加入一定量的待检物质。
如何选择合适的阴性对照?
阴性对照的基本组成也应该尽量与检测样本的组成一致,先行检测确定其中不含待检物质。比如,检测人血清标本时,阴性对照应该选择正常人血清;检测免疫动物血清中抗体效价时,阴性对照应该选择该动物的免疫前血清。
大鼠山梨醇脱氢酶(SDH)ELISA试剂盒如何选择优化的包被条件?
1、包被抗原的选择
包被抗原可分为天然蛋白、重组蛋白和小分子抗原三大类。天然蛋白需经纯化才能用直接吸附法包被,对于含杂质较多的抗原可以采用间接捕获法包被(先用能够与目的抗原反应的物质如抗体直接吸附在酶标板上,再通过特异性反应使抗原固相化)。经纯化的重组蛋白一般皆可直接包板。
小分子抗原比如多肽以及一些小分子有机化合物,由于分子量太小,往往难于直接吸附在酶标板上,一般都先使其与无关蛋白质如BSA等偶联,偶联物吸附于固相载体上。
2、包被液的选择
一般常用的是pH9.6的碳酸盐缓冲液,如果包被的抗原在碱性条件下不稳定的话,也可以使用pH7.2的磷酸盐缓冲液。
3、包被温度的选择
通常是4-8度条件下过一夜或者37度保温2小时,我们强烈建议4-8度条件下包被,有利于蛋白活性的保持。
4、包被浓度的选择
包被的适浓度随固相载体和包被物的性质变化,一般蛋白质的包被浓度为1-5ug/ml,要明确针对特定包被抗原的合适包被浓度需要通过实验来确定。